酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，一般簡(jiǎn)稱為Elisa。Elisa技術(shù)是免疫標(biāo)記技術(shù)的一種，因?yàn)榫哂锌焖?，方便，?jiǎn)單，定性，定量甚至定位的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于廣大科研實(shí)驗(yàn)中。下面我們來(lái)介紹下常用的幾種實(shí)驗(yàn)原理。

1， 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法一般分為直接競(jìng)爭(zhēng)法和間接競(jìng)爭(zhēng)法。間接競(jìng)爭(zhēng)法在常見的實(shí)驗(yàn)中用的不是很多，

我們就主要介紹一下直接競(jìng)爭(zhēng)法的原理。直接競(jìng)爭(zhēng)法就是將合適的包被抗體包被于微孔板中，

加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合的位點(diǎn)，然后加入標(biāo)準(zhǔn)品（樣本）和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，在合適的溫度和一定時(shí)間的孵育，洗滌，再加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素來(lái)進(jìn)行反應(yīng)，TMB顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈負(fù)相關(guān)。
  這個(gè)方法一般多用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì)。檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)及抗體時(shí)，這種方法也可以用。但是檢測(cè)大分子抗原時(shí)，由于空間位阻的影響，使得該檢測(cè)方法沒(méi)有雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)靈敏度高；檢測(cè)抗體時(shí)，可能由于兩種競(jìng)爭(zhēng)的抗體來(lái)源不一，導(dǎo)致兩種抗體趨同性不高，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的可靠性不高。

2， 間接法

間接法一般用來(lái)檢測(cè)抗體。間接法是將一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板中，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)后，加入待測(cè)樣本，然后加入酶標(biāo)二抗，過(guò)一定的時(shí)間孵育和洗滌后，加底物顯色。一般而言，在間接法檢測(cè)抗體實(shí)驗(yàn)中，由于酶標(biāo)二抗的局限性，一般檢測(cè)的抗體為總的IgG。

3， 雙抗體夾心法

雙抗體夾心法，它是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后加入待測(cè)標(biāo)本，通過(guò)加入檢測(cè)抗體，酶標(biāo)記第二抗體后用TMB底物顯色，待測(cè)物的濃度與微孔板中顏色的深淺呈正相關(guān)。
  雙抗體夾心法多用于含有多個(gè)抗原表位的大分子物質(zhì)。因?yàn)榇藱z測(cè)方法需要兩種抗體，所以就關(guān)系到抗體配對(duì)的問(wèn)題。一般常用的抗體配對(duì)方法有下面幾種：包被抗體為單抗，檢測(cè)抗體為單抗，但這兩種單抗針對(duì)的抗原表位不同；包被抗體為單抗，檢測(cè)抗體為多抗；包被抗體為多抗，檢測(cè)抗體為多抗，這兩種多抗一般是來(lái)源于不同的宿主。
  雙抗體夾心法在應(yīng)用酶標(biāo)第二抗體時(shí)，要注意一個(gè)關(guān)鍵是：第二抗體必須只能針對(duì)檢測(cè)抗體，而不能針對(duì)包被抗體。由于酶標(biāo)二抗具有局限性，現(xiàn)在一般廠家都引入生物素親和素放大系統(tǒng)，這種系統(tǒng)不僅能提高反應(yīng)靈敏度，而且也更加方便，我們只需對(duì)檢測(cè)抗體進(jìn)行生物素標(biāo)記，不需要對(duì)每一種不同來(lái)源的二抗進(jìn)行酶標(biāo)記，只需對(duì)親和素做HRP標(biāo)記就可以省去很多麻煩的工作。

4， 雙抗原夾心法

雙抗原夾心法，與雙抗體夾心法類似，基本原理是將已知濃度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板表面，對(duì)未結(jié)合位點(diǎn)用無(wú)關(guān)蛋白載體進(jìn)行封閉后，加入待測(cè)樣本，然后加入生物素標(biāo)記的抗原和HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，經(jīng)TMB顯色后終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀數(shù)之后即可計(jì)算待測(cè)物濃度。雙抗原夾心法與間接法都可以對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)，但是前者檢測(cè)的是針對(duì)該抗原的所有種類的抗體，包含IgG, IgM, IgA，IgD, IgE，這是間接法做不到的。

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