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人S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒,人S100B蛋白ELISA試劑盒,人S-100B

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 S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒,人S100B蛋白ELISA試劑盒,人S-100B ELISA試劑盒

 

一、基本信息:

中文名稱:人S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒,人S100B蛋白ELISA試劑盒,人S-100B ELISA試劑盒

英文名稱:Human Soluble protein-100B ELISA Kit, Human S-100B ELISA Kit

品牌:澤維爾

貨號:ZWL-H00007

規(guī)格:96T/盒和48T/

樣本體積:50~100ul

保存溫度及有效期:2~8度下6個月,盡量保持恒溫,以免抗體失活。

用途:用于測定血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中待測物質(zhì)的含量。

二、試劑盒原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法測定樣本中待測物的水平。用已知濃度的待測物質(zhì)的標準品和未知濃度的樣品依次先后加入微孔板,先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,再與親和素標記過的HRP結(jié)合,再經(jīng)過徹底洗滌后,加入底物A、B,底物在HRP酶的催化下產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中待測物質(zhì)的含量。

三、試劑盒組成:

 

四、試劑盒的操作步驟:

1.         標準品的加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。

4.         溫育:用封板膜封板后置37溫育60分鐘。

5.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

6.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

7.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

8.         終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

9.         測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

五、實驗操作過程中的注意點:

1.       試劑應(yīng)按說明書要求保存,實驗前樣本和試劑盒室溫平行1小時,如果樣本是凍存樣本,應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進行解凍,不建議直接室溫解凍。

2.       若樣本較少,用不完的酶標應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免失效。

3.       在做完整個實驗儀器之前,儀器最好預(yù)熱半小時,這個計算好時間,也可以直接將儀器一直開著,直到整個實驗結(jié)束。

4.       在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,不要吹打下去。特別忌諱在孔內(nèi)壁流向孔。整個加液過程不要產(chǎn)生氣泡。(洗滌液除外)

5.       封板膜只限一次使用,避免交叉使用。

六、不同樣本的處理要求及保存溫度:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?span lang="EN-US">2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

七、在選擇試劑盒類型時需先明確以下幾點:

1.       要檢測的是抗體還是抗原。

2.       要定量檢測還是定性檢測

3.       是否需要檢測具有特異抗體的類型

 

 

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